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豬細胞巨化病毒性感染

手機:M版  分類:養豬技術  編輯:梅梅

  豬細胞巨化病毒感染是豬細胞巨化病毒引起仔豬一種常見傳染病。在易感豬群中可引起胚胎死亡和仔豬鼻炎、肺炎及生長發育不良、增重差等臨床癥狀。

  Done(1955)在豬鼻甲骨黏膜黏液腺中巨細胞中發現有大量嗜鹼性核內包涵體,首次從英格蘭分離獲得皰疹樣病毒粒子;這是繼偽狂犬病病毒之後發現的第二個豬的皰疹病毒。因患豬臨床上以鼻炎為特徵,並在感染的鼻甲骨黏膜黏液腺中巨細胞可見到大量嗜鹼性核內包涵體,因而將PCMV引起的這種疾病稱為包涵體鼻炎。據電鏡觀察,病毒的性質及其所致病變與人的細胞巨化病毒和豚鼠的唾液腺病毒類似,而本病毒的感染動物的範圍僅限於豬,故又將該病毒稱為豬細胞巨化病毒(PCMV)。本病毒分佈相當廣泛。從近年的報道看,常規條件下飼養的大多數豬群均存在PCMV感染,PCMV抗體陽性率都很高,但大多數為亞臨床型,臨床發病則很少見。歐洲很多國家都發現有本病。德國用PCR方法,調查豬的流行率要高於50%。在英國進行的血清學檢查的結果表明:90%以上的豬群曾受到過感染,通過ELISA或IFA檢測,發現98%以上的豬血清呈陽性。在日本自1972年就有本病病理學方面的報道,1981年6~11月,對441例肥育豬血清用間接熒光抗體法做了抗體調查,有434例(98.4%)為陽性。用ELISA所作的調查,436份樣品有433份(99.4%)為強陽性,並於1985年首次分離到病毒。北美和澳大利亞也有報道,其中美國發病率甚高,豬群的抗體保有率為90%。說明凡飼養豬只的地區,都可能有本病毒的感染。

  1病原學

  1.1形態結構

  PCMV屬於皰疹病毒科,β皰疹病毒亞科、巨細胞病毒屬的成員;近來有人認為將本病毒劃在玫瑰疹病毒屬中更為恰當[3] 。PCMV在形態上屬於典型的皰疹病毒,中央為電子緻密的芯髓,芯髓常為卵圓形、也有長方形到啞鈴狀,其直徑為45~70nm。在芯髓外圍為正十二面體核衣殼,其直徑約80~100nm,最外圍為囊膜,多為單層,偶爾也有雙層,有囊膜的病毒顆粒直徑為120~150nm。囊膜上還有纖突。核衣殼與囊膜之間似乎有一圈半透明帶包圍着電子緻密外套相分隔。感染病毒后的細胞體積極度增大,可達正常細胞的6倍,線粒體、內質網和高爾基體也出現腫脹,超薄切片可見巨大的核內包涵體,常呈結晶體樣排列。在病毒複製後期的細胞裂解過程中,在細胞漿中也可看到晶體樣排列的病毒。與所見到的其他皰疹病毒中一樣,也常常見到沒有芯髓或無囊膜僅有核衣殼的病毒粒子。

  最近日本學者Goltz等(2000)採用PCR方法擴增了PCMV的DNA聚合酶基因,並進行測序。對德國株的DNA聚合酶(DPOL)位點進行了擴增,測定了2個完整開放性閱讀框(ORF)及包括完全DPOL基因和糖蛋白gB3′端的2個部分ORF序列。推導的氨基酸序列與β 皰疹病毒的各個蛋白有很高的同源性,特別是與人皰疹病毒6型和7型的ORF 36~39同源性更高。與日本株、西班牙株、英國株的DPOL基因比較,僅有0.4%~1%的差異。對PCMV的主要衣殼蛋白(MCP)基因也得以鑒定。序列分析表明,PCMV的MCP基因全長4026個核苷酸,編碼1341個氨基酸的蛋白,據預計MCP的分子量為151,456Da,系統發育分析認為,PCMV與人皰疹病毒6型或7型的同源性高於與人或鼠細胞巨化病毒的同源性。人工感染PCMV的血清不能與細菌表達的MCP反應,表明POMV的MCP可能與感染后體液免疫應答無關。

  1.2病毒培養

  PCMV在體外增殖有一定難度,用豬的腎或睾丸原代細胞、末梢血液中的巨噬細胞以及豬腎細胞系培養,均不能增殖,但直接用已感染了病毒的豬腎或睾丸,作細胞帶毒培養,病毒則可充分增殖,並出現細胞病變。在原代細胞中只有3~5周齡仔豬的肺泡巨噬細胞最適宜於病毒的首次分離和連續傳代。PCMV在豬肺泡巨噬細胞培養物上增殖很慢,接種后3~14天才可看到巨細胞形成和核內包涵體,偶爾還可見細胞漿內包涵體,但其大小比核內包涵體要小。在接種11~14天後,PCMV的最高滴度可達5.5TCID50/ml。然而,肺泡巨噬細胞自身不能繁殖,因此,必須用原代細胞培養物進行病毒的傳代。由於肺泡巨噬細胞經常受到包括PCMV和PRRSV在內的病毒污染,故在細胞使用之前要對這些病毒進行監測,確保安全可靠、無污染。較可靠的辦法是使用無菌豬或SPF豬肺泡巨噬細胞。據KawamuraH等報道,豬輸卵管細胞可支持該病毒複製,Bouillant等建立了輸卵管類上皮和輸卵管類成纖維細胞,可以用於病毒培養。其細胞病變不明顯,必須用姬姆薩染色或標記抗體染色后觀察。另有報道,十四烷酰佛波醇乙酸酯(120tertadecanoylphorbol13 acetate)能增強病毒的複製。

  1.3抗原特性

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