首頁 > 農業技術 > 畜禽養殖 > 養鴨技術 > 鴨病防治 > 野鴨大腸桿菌和沙門氏菌混合感染的實驗室診斷

野鴨大腸桿菌和沙門氏菌混合感染的實驗室診斷

手機:M版  分類:養鴨技術  編輯:夜衣人

野鴨大腸桿菌和沙門氏菌混合感染的實驗室診斷 標籤:鴨大腸桿菌 野鴨 畜禽養殖 養鴨技術 鴨病防治

  鳥禽類大腸桿菌和沙門氏桿菌混合感染是當前禽病流行中的主要趨勢,是養禽業的常見病和多發病。2種細菌血清型種類較多,不同地區差別較大;不同菌株之間不產生交叉保護作用,極易產生耐藥性。一旦鳥禽發病,治療時間長、難度大。

  某地野生動物園的一群美國綠頭野鴨,在2002年7月中旬突然發病,表現為腳軟、不能站立、拉稀、精神不振,死亡率高,曾用青霉素、四環素等藥物治療無效。為了確診,將病死野鴨進行細菌分離、培養、生化鑒定、葯敏試驗等。現將結果報告如下。

  1材料與方法

  1.1材料

  1.1.1主要儀器。高壓滅菌鍋,電子天平,生化培養箱,顯微鏡,恆溫箱,無菌操作台。

  1.1.2被檢材料。病死野鴨的心血、肝等組織。

  1.1.3培養基。普通瓊脂、胰蛋白腖、瓊脂培養基。

  1.1.4葯敏紙片。青霉素、四環素、萬古黴素、桿菌肽、妥布黴素、環丙沙星、諾氟沙星、苯唑青霉素、阿米卡星、頭孢噻肟、頭胞呋新、卡那黴素、氧氟沙星、壯觀黴素共14種葯敏紙片。

  1.1.5微量發酵管。葡萄糖、賴氨酸、鳥氨酸、硫化氫、蛋氨酸、乳糖、衛矛醇、苯丙氨酸、尿素酶、枸椽酸、氨基酸(對照級)共11種微量發酵管。

  1.1.6姬姆薩氏染液。

  1.1.7試驗動物。8隻10~20g昆系小白鼠,由西南農業大學榮昌校區動物科提供。

  1.2方法

  1.2.1染色鏡檢。取病死野鴨心血、肝抹片或塗片,按常規姬姆薩氏染色後鏡檢。

  1.2.2分離培養。無菌採集病野鴨心血、肝等,分別接種普通肉湯和胰蛋白腖肉湯,37℃培養24h后觀察。若有細菌生長,再劃線接種普通瓊脂平板,37℃培養24h。

  1.2.3純化細菌。將普通瓊脂平板上的細菌接種到SS瓊脂平板,37℃培養24h,分別挑取單個菌落接種普通肉湯,37℃培養24h,純化並進行編號,備用(紅色菌落編為1號,灰白色菌落編為2號,黑色菌落編為3號)。

  1.2.4接種動物。將病料組織接種普通肉湯後生長的細菌,接種小白鼠,腹腔注射0.3mL/只,接種后觀察發病和死亡情況。

  1.2.5鏡檢。挑取SS瓊脂上的不同菌落和純化后的細菌肉湯分別塗片,革蘭氏染色,鏡檢。

  1.2.6葯敏試驗。將純化的1、2、3號菌落按常規方法接種在SS瓊脂上,劃線,貼上藥敏紙片,37℃恆溫培養24h,觀察抑菌圈的大小,記錄結果。

  1.2.7生化試驗。將純化后的3種菌落,分別按常規方法接種於細菌微量發酵管中,37℃培養24h觀察7d,記錄結果。

  2結果

  2.1病料塗片姬姆薩氏染色鏡檢,可見有大量散在的、單個的、纖細的染成淡紫色的細長桿菌存在,3株純化菌塗片革蘭氏染色鏡檢,可見紅色、兩端鈍圓、散在短小桿菌。

  2.2病菌分離培養在普通肉湯和胰蛋白腖肉湯中,可見均有細菌生長、肉湯混濁、試管底部有沉澱。接種SS瓊脂平板,可見有紅色、灰白色和頂端為黑色的3種菌落,細菌形態為光滑、濕潤、隆起。

  2.3生化試驗培養分離的1號菌,能分解葡萄糖、賴氨酸、衛矛醇、枸椽酸,不產生H2S,不分解鳥氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、尿素、氨基酸;而2、3號菌,能分解葡萄糖、賴氨酸、衛矛醇、鳥氨酸、氨基酸,產生H2S,但不發酵乳糖,也不分解蛋氨酸、苯丙氨酸,其中2號菌能分解尿素酶。

  2.4動物接種混合菌接種小白鼠,於十幾小時后小白鼠死亡,共死亡7隻。剖解見心包積液,小腸出血,心冠狀脂肪小點出血,並從死亡小白鼠心血中分離到混合接種菌。

  2.5葯敏試驗通過試驗,發現大腸桿菌分離株(1號菌)和沙門氏桿菌分離株(2號強菌),對頭孢噻肟、阿米卡星、壯觀黴素高敏,對青霉素、四環素等產生耐藥性。參照葯敏判斷標準。

  3討論與分析

  病理剖檢可見,病鴨心肌出血、肝瘀血腫大、小腸出血;細菌染色鏡檢可見,兩端鈍圓的、散在的、短小桿菌;SS瓊脂培養基上,有圓形、光滑、濕潤、隆起的菌落生長;生化試驗結果顯示:紅色、黑色和灰白色菌落都能分解葡萄糖、賴氨酸、鳥氨酸,且紅色菌落能分解乳糖,黑色菌落和灰白色菌落能產生H2S。由此確診該野鴨為大腸桿菌和沙門氏菌混合感染。

  從生化試驗結果可以看出,本次分離的紅色菌落能分解葡萄糖、賴氨酸、鳥氨酸、乳糖,不產生H2S,不分解尿素酶(與方定一對大腸桿菌生化試驗結果基本一致);但分離的紅色菌落不分解鳥氨酸,這可能與不同菌株的大腸桿菌有關。分離的黑色菌落和灰白色菌落能分解葡萄糖、賴氨酸,不發酵乳糖,不分解尿素酶,對苯內氨酸不脫氨(與董國雄報道的沙門氏菌生化試驗結果基本一致);但本次的沙門氏桿菌分離株能水解尿素酶,這可能與沙門氏菌的血清型不同有關。

  葯敏試驗結果表明:本試驗的3株分離菌,對頭孢噻肟、頭孢呋新、環丙沙星、卡那黴素呈現高敏。除此之外,大腸桿菌分離株還對壯觀黴素、丁胺卡那黴素高敏,但對四環素、妥布黴素出現耐葯;沙門氏菌分離株,還對壯觀黴素、妥布黴素高敏,但對四環素中敏和對青霉素、桿菌肽和萬古黴素產生耐葯。引起這些結果的原因,可能與大腸桿菌和沙門氏桿菌的血清型不同或長期用藥的原因,這在周倫江、龍虎、張健、程安春、張文慧的研究中有類似的報道。

  葯敏試驗表明,本次分離到的大腸桿菌和沙門氏桿菌,對頭孢類藥物最敏感,所以給野鴨群投以復方先鋒黴素(頭孢唑啉)后病情得到了控制。因此,在診療中,宜及時進行葯敏試驗,選擇高敏藥物治療,可達到較好效果。

您正在瀏覽: 野鴨大腸桿菌和沙門氏菌混合感染的實驗室診斷
網友評論
野鴨大腸桿菌和沙門氏菌混合感染的實驗室診斷 暫無評論